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國家食用菌加工技術(shù)研發(fā)中心藥食兩用資源平臺在譜效關(guān)系、成分敲出結(jié)合分子對接技術(shù)快速鑒定活性成分及作用機制研究方面取得進展

   2021-03-10 國家食用菌加工技術(shù)研發(fā)專業(yè)中心7640
  該成果以“A rapid method and mechanism to identify the active compounds in Malus micromalus Makino fruit with spectrum-effect relationship, components knock-out and molecular docking technology”為題發(fā)表于《Food and Chemical Toxicology》雜志上(即時IF:5.759,JCR TOP Q2區(qū))

  薔薇科蘋果屬植物西府海棠Malus micromalus Makino的果實化學(xué)成分種類豐富,主要包括黃酮類、有機酸類和揮發(fā)性成分等,藥理學(xué)研究表明,黃酮類化合物具有抗腫瘤、預(yù)防心腦血管老化、淡化肝斑、抗炎、抗氧化和抗衰老等功效。

  圖 1 西府海棠果實

  本研究以西府海棠果實對酪氨酸酶的活性影響,結(jié)合HPLC指紋圖譜構(gòu)建“譜-效模型”,通過譜-效關(guān)系篩選出活性物質(zhì),并采用成分敲出法和UPLC-MS/MS法對目標(biāo)成分進行結(jié)構(gòu)鑒定。

  Fig.2 HPLC fingerprints of M. micromalus fruit and its reference fingerprint (R)

  Fig.3 Standardization regression coefficient of PLSA model of characteristics common peak-tyrosinase inhibition activity.

  Fig.4 The high resolution mass spectra of Peak 2 knocked-out component.

  Fig.5 The high resolution mass spectra of Peak 8 knocked-out component.

  Fig.6 The MS/MS fragmentation pathway of p-Coumaric acid (a)、

  4-O-β-Glucopyranosyl-cis-coumaric acid (c)。

  在此基礎(chǔ)上,采用酶促反應(yīng)動力學(xué)探討敲出成分對酪氨酸酶催化反應(yīng)的影響及動力學(xué)模型分析,并借助分子對接技術(shù)預(yù)測活性成分和酪氨酸酶的結(jié)合模式,闡明西府海棠果實中對酪氨酸酶起抑制/激活作用的活性成分及其作用機制。

  Fig. 7 Lineweaver-Burk plots of tyrosinase after the addition of p-coumaric acid (a),phloridzin (b),quercetin-3-O-α-rhamnoside (c) and 4-O-β-glucopyranosyl-cis-coumaric acid (d)。


  Fig. 8 Molecular docking interaction of tyrosinase with p-coumaric acid(a), phloridzin(b),quercetin-3-O-α-rhamnoside(c) and 4-O-β-glucopyranosyl-cis-coumaric acid(d)

  Note: (a, b, c, d) Plane projection diagram of the interaction between compound and tyrosinase.

  本研究通過譜-效關(guān)系研究發(fā)現(xiàn),在濃度0.5 g/mL時,西府海棠果實實對酪氨酸酶活性的抑制作用效果最好;PLS-DA分析顯示,西府海棠果實特征色譜中P2、P3、P5和P6對酪氨酸酶活性的抑制作用呈正相關(guān)(R>0.1);P8和P9對酪氨酸酶活性的抑制作用呈負相關(guān)(R<-0.1)。通過UPLC-MS/MS法鑒定P2、P6、P8、P10、P11和12分別為對香豆酸、阿魏酸-?;咸烟擒?、香豆酸-4-O-葡萄糖苷、根皮素-2'-木糖葡萄糖苷、根皮苷和槲皮素-3-O-鼠李糖苷。酪氨酸酶動力學(xué)實驗結(jié)果表明:對香豆酸(P2)、根皮苷(P11) (P11>0.50 mmol/L)對酪氨酸酶具有競爭性抑制作用,其中根皮苷濃度小于0.25 mmol/L時,具有混合性抑制作用。香豆酸-4-O-葡萄糖苷(P8)、槲皮素-3-O-鼠李糖苷(P12)分別在0~9 mmol/L、0.3-11 mmol/L的濃度范圍內(nèi)主要表現(xiàn)為非競爭性激活類型,而槲皮素-3-O-鼠李糖苷(P12)為混合型激活類型。酪氨酸酶分子對接結(jié)果表明:對香豆酸(P2)、香豆酸-4-O-葡萄糖苷(P8)、根皮苷(P11)、槲皮素-3-O-鼠李糖苷(P12)位于酶的疏水口袋活性中心,與酪氨酸酶殘基以氫鍵結(jié)合,并與周圍眾多的疏水殘基存在疏水作用,共同維持復(fù)合物的結(jié)構(gòu)。

  利用譜效關(guān)系,成分敲出及高分辨質(zhì)譜鑒定技術(shù)快速鑒定復(fù)雜中藥體系活性成分,闡述中藥整體觀,挖掘活性成分/成分群領(lǐng)域,本團隊已形成了成熟的研究策略。研究成果先后發(fā)表在 Food and Chemical Toxicology (https://doi.org/10.1016/j.fct.2019.110754);

  Food Science and Human Wellness (https://doi.org/10.1016/j.fshw.2021.02.019);

  Food and Chemical Toxicology (https://doi.org/10.1016/j.fct.2019.110754);

  International Journal of Molecular Sciences (https://doi.org/10.3390/ijms19113439);

  Frontiers in pharmacology (https://doi.org/10.3389/fphar.2020.01342)等雜志。并以此技術(shù)創(chuàng)新集成,獲得2020年河南省科學(xué)技術(shù)進步二等獎。
 
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