【英文名稱】：Ganoderma Lucidum Extract

　　【使用部位】：本品為多孔菌科真菌赤芝Ganoderma lucidum(Leyss.exFr.)Karst.或紫芝Ganoderma sinense Zhao，Xu et Zhang的干燥子實(shí)體。

　　【主要成分】：主要成分為氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、真菌溶菌酶（fungal lysozyme），以及糖類（還原糖和多糖）、麥角甾醇、三萜類、香豆精甙、揮發(fā)油、硬脂酸、苯甲酸、生物堿、維生素B2及C等；孢子還含甘露醇、海藻糖（trehalose）。

　　【原料來源】：主要產(chǎn)區(qū)黑龍江，吉林，貴州，云南，陜西，四川等。全年采收，除去雜質(zhì)，剪除附有朽木、泥沙或培養(yǎng)基質(zhì)的下端菌柄，陰干或在40?0°C烘干。外形呈傘狀，菌蓋腎形、半圓形或近圓形，直徑10?8cm，厚1?2cm。皮殼堅(jiān)硬，黃褐色至紅褐色，有光澤，具環(huán)狀棱紋和輻射狀皺紋，邊緣薄而平截，常稍內(nèi)卷。菌肉白色至淡棕色。菌柄圓柱形，側(cè)生，少偏生，長7?15cm，直徑1?.5cm，紅褐色至紫褐色，光亮。孢子細(xì)小，黃褐色。栽培品子實(shí)體較粗壯、肥厚，直徑12?2cm，厚1.5cm?4cm。皮殼外常被有大量粉塵樣的黃褐色孢子。

　　【存儲(chǔ)條件】：避光儲(chǔ)存于密封容器中

　　【原料采購標(biāo)準(zhǔn)】

　　【產(chǎn)品規(guī)格】：靈芝中含氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)、真菌溶菌酶（fungal lysozyme），以及糖類（還原糖和多糖）、麥角甾醇、三萜類、香豆精甙、揮發(fā)油、硬脂酸、苯甲酸、生物堿、維生素B2及C等；孢子還含甘露醇、海藻糖（trehalose）。市場常見規(guī)格為

　　【外觀】：淺黃棕色可流動(dòng)性粉末，有本品固有的香氣，味苦；

　　【目數(shù)】：30~100目，也可根據(jù)客戶要求

　　【含量測定方法】：

　　靈芝提取物水溶性粗多糖的測定方法

　　1.范圍

　　本方法規(guī)定了靈芝提取物中以葡聚糖為主要結(jié)構(gòu)分子量在10000以上的水溶性粗多糖的測定方法。

　　本方法最低檢出濃度：5.0mg/L。

　　本方法最佳線性范圍：5.0ug/mL—200ug/mL。

　　2.原理

　　食品中分子量>10000的高分子物質(zhì)在80%乙醇溶液中沉淀，與水溶液中單和低聚糖分離，用堿性二價(jià)銅試劑選擇性的從其它高分子物質(zhì)中沉淀具有葡聚糖結(jié)構(gòu)的水溶性多糖，用苯酚-硫酸反應(yīng)以碳水化合物形式比色測定其含量，其顏色強(qiáng)度與水溶性粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)參照物并以此計(jì)算食品中水溶性粗多糖含量。

　　3．試劑

　　本方法所用試劑除特殊注明外，均為分析純；所用水為去離子水或同等純度蒸餾水。

　　3.1 乙醇溶液(80%):20mL水中加入無水乙醇80mL，混勻。

　　3.2 氫氧化鈉溶液(100g/L):稱取100g氫氧化鈉，加水溶解并稀釋至1L，加入固體無水硫酸鈉至飽和，備用。

　　3.3 銅試劑儲(chǔ)備液:稱取3.0gCuSO4.5H2O，30.0g檸檬酸鈉，加水溶解并稀釋至1L，混勻備用。

　　3.4 銅試劑溶液：取銅儲(chǔ)備液50mL，加水50mL，混勻后加入固體無水硫酸鈉12.5g并使其溶解。臨用新配。

　　3.5 洗滌劑：取水50mL，加入10mL銅試劑溶液，10mL氫氧化鈉溶液，混勻，臨用新配。

　　3.6 硫酸溶液（10%）：取100mL濃硫酸加入到800mL左右水中，混勻，冷卻后稀釋至1L。

　　3.7 苯酚溶液（50g/L）：稱取精制苯酚5.0g，加水溶解并稀釋至100mL，混勻。溶液置冰箱中可保存一月。

　　3.8 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液:精密稱在硫酸干燥器中干燥至恒重的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)0.5000g，加溶解，并定容至50mL，混勻，置冰箱中保存。此溶液每毫升含10.0mg葡萄糖。

　　3.9 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)使用液:吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液1.00mL，置于100mL容量瓶中，加水至刻度，混勻，置冰箱中保存。此溶液每毫升含葡萄糖0.10mg。

　　4．儀器

　　4.1 分光光度計(jì)

　　4.2 離心機(jī)

　　4.3 旋轉(zhuǎn)混勻器

　　5.分析步驟

　　5.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備:

　　精密吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)使用液0.00，0.10，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00 mL(相當(dāng)于葡萄糖，0.010，0.020，0.040，0.060，0.080，0.10mg)分別置于25mL比色管中，準(zhǔn)確補(bǔ)充水至2.0mL，加入50g/L苯酚溶液1.0mL，在旋轉(zhuǎn)混勻器上混勻，小心加入濃硫酸10.0mL，于旋轉(zhuǎn)混勻器上小心混勻，置沸水浴中煮沸2min.，冷卻后用分光光度計(jì)在485nm波長處以試劑空白溶液為參比，1cm比色皿測定吸光度值。以葡萄糖濃度為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

　　5.2 試樣處理

　　5.2.1 試樣提取:稱取混合均勻的固體試樣2.0g，置于100mL容量瓶中，加水80mL左右，于水浴上加熱2h，冷卻至室溫后補(bǔ)加水至刻度，混勻，過濾，棄去初濾液，收集余下濾液供沉淀多糖。

　　5.2.2 沉淀粗多糖:精密取5.2.1濾液5.0mL或液體試樣5.0mL，置于50mL離心管中，加入無水乙醇20mL，混勻5min.，以3000rpm離心5min.，棄去上清液。殘?jiān)?0%乙醇溶液數(shù)毫升洗滌，離心后棄上清液，反復(fù)3—4次操作。殘?jiān)盟芙獠⒍ㄈ葜?.0mL，混勻，供沉淀葡聚糖。

　　5.2.3 沉淀葡聚糖:精密取5.2.2溶液2mL置于20mL離心管中，加入100g/L氫氧化鈉溶液2.0mL，銅試劑溶液2.0mL，沸水浴中煮沸2min.，冷卻后以3000rpm離心5min.，棄去上清液。殘?jiān)孟礈煲簲?shù)毫升洗滌，離心，棄去上清液，反復(fù)3次操作，殘?jiān)?00mL/L硫酸溶液2.0 mL溶解并轉(zhuǎn)移至50mL容量中，加水稀釋至刻度，混勻。此溶液為試樣測定液。

　　5.3 試樣測定:精密吸取試樣測定液2.0 mL置于25 mL比色管中，加入50g/L苯酚溶液1.0 mL，在旋轉(zhuǎn)混勻器上混勻后，小心加入濃硫酸10.0mL后于旋轉(zhuǎn)混勻器上小心混勻，置沸水浴中煮沸2min.，冷卻至室溫，用分光光度計(jì)在485nm波長處，以試劑空白為參比，1cm比色皿測定吸光度值。從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出葡萄糖含量，計(jì)算試樣中水溶性粗多糖含量。同時(shí)作試樣空白實(shí)驗(yàn)。

　　5．4 分析結(jié)果表述

　　試樣中水溶性粗多糖的含量按式（5.4.1）計(jì)算。

　　5．4．1 計(jì)算

　　式中:

　　x—試樣中水溶性粗多糖含量(以葡萄糖計(jì))，mg/g;

　　m1---試樣測定液中葡萄糖的質(zhì)量，mg;

　　m2---試樣空白液中葡萄糖質(zhì)量，mg;

　　m---試樣質(zhì)量，g;

　　V1---試樣提取液總體積，mL;

　　V2---沉淀粗多糖所用試樣提取液體積，mL;

　　V3---粗多糖溶液體積，mL;

　　V4---沉淀葡聚糖所用粗多糖溶液體積，mL;

　　V5--試樣測定液總體積，mL;

　　V6---測定用試樣測定溶液體積，mL。

　　5．4．2 結(jié)果表示

　　計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。

　　6.技術(shù)參數(shù)

　　回收率：不同食品中不同濃度加標(biāo)回收的回收率為87.8～110.8%。

　　精密度：同一試樣10次測定結(jié)果的RSD為5.8%。

　　干擾因素：測定過程中避免碳水化合物的玷污干擾。

　　靈芝提取物三萜皂甙的檢測方法

　　1，對(duì)照品溶液的制備取齊墩果酸對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含0.2mg的溶液，即得。

　　2，標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密量取對(duì)照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml，分別置15ml具塞試管中，揮干，放冷，精密加入新配制的香草醛冰醋酸溶液(精密稱取香草醛0.5g，加冰醋酸使溶解成10ml，即得）0.2ml高氯酸0.8ml，搖勻，在70°C水浴中加熱15分鐘，立即置冰浴中冷卻5分鐘，取出，精密加入乙酸乙酯4ml，搖勻，以相應(yīng)試劑為空白，照紫外-可見分光光度法(通則0401)，在546nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)、濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

　　3，供試品溶液的制備取本品粉末約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加乙醇50ml，超聲處理（功率140W，頻率42kHz)45分鐘，濾過，濾液置100ml量瓶中，用適量乙醇，分次洗滌濾器和濾渣，洗液并人同一量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，即得。

　　4，測定法精密量取供試品溶液0.2ml，置15ml具塞試管中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下的方法，自“揮干”起，同法操作，測定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中齊墩果酸的含量，計(jì)算，即得。