靈芝提取物

　　【英文名稱】：Ganoderma Lucidum Extract

　　【使用部位】：本品為多孔菌科真菌赤芝Ganoderma lucidum(Leyss.exFr.)Karst.或紫芝Ganoderma sinense Zhao，Xu et Zhang的干燥子實體。

　　【主要成分】：主要成分為氨基酸、多肽、蛋白質、真菌溶菌酶（fungal lysozyme），以及糖類（還原糖和多糖）、麥角甾醇、三萜類、香豆精甙、揮發(fā)油、硬脂酸、苯甲酸、生物堿、維生素B2及C等；孢子還含甘露醇、海藻糖（trehalose）。

　　【原料來源】：主要產區(qū)黑龍江，吉林，貴州，云南，陜西，四川等。全年采收，除去雜質，剪除附有朽木、泥沙或培養(yǎng)基質的下端菌柄，陰干或在40?0°C烘干。外形呈傘狀，菌蓋腎形、半圓形或近圓形，直徑10?8cm，厚1?2cm。皮殼堅硬，黃褐色至紅褐色，有光澤，具環(huán)狀棱紋和輻射狀皺紋，邊緣薄而平截，常稍內卷。菌肉白色至淡棕色。菌柄圓柱形，側生，少偏生，長7?15cm，直徑1?.5cm，紅褐色至紫褐色，光亮。孢子細小，黃褐色。栽培品子實體較粗壯、肥厚，直徑12?2cm，厚1.5cm?4cm。皮殼外常被有大量粉塵樣的黃褐色孢子。

　　【存儲條件】：避光儲存于密封容器中

　　【原料采購標準】

　　【產品規(guī)格】：靈芝中含氨基酸、多肽、蛋白質、真菌溶菌酶（fungal lysozyme），以及糖類（還原糖和多糖）、麥角甾醇、三萜類、香豆精甙、揮發(fā)油、硬脂酸、苯甲酸、生物堿、維生素B2及C等；孢子還含甘露醇、海藻糖（trehalose）。市場常見規(guī)格為

　　【外觀】：淺黃棕色可流動性粉末，有本品固有的香氣，味苦；

　　【目數(shù)】：30~100目，也可根據客戶要求

　　【含量測定方法】：

　　靈芝提取物水溶性粗多糖的測定方法

　　1.范圍

　　本方法規(guī)定了靈芝提取物中以葡聚糖為主要結構分子量在10000以上的水溶性粗多糖的測定方法。

　　本方法最低檢出濃度：5.0mg/L。

　　本方法最佳線性范圍：5.0ug/mL—200ug/mL。

　　2.原理

　　食品中分子量>10000的高分子物質在80%乙醇溶液中沉淀，與水溶液中單和低聚糖分離，用堿性二價銅試劑選擇性的從其它高分子物質中沉淀具有葡聚糖結構的水溶性多糖，用苯酚-硫酸反應以碳水化合物形式比色測定其含量，其顏色強度與水溶性粗多糖中葡聚糖的含量成正比，以葡萄糖為標準參照物并以此計算食品中水溶性粗多糖含量。

　　3．試劑

　　本方法所用試劑除特殊注明外，均為分析純；所用水為去離子水或同等純度蒸餾水。

　　3.1 乙醇溶液(80%):20mL水中加入無水乙醇80mL，混勻。

　　3.2 氫氧化鈉溶液(100g/L):稱取100g氫氧化鈉，加水溶解并稀釋至1L，加入固體無水硫酸鈉至飽和，備用。

　　3.3 銅試劑儲備液:稱取3.0gCuSO4.5H2O，30.0g檸檬酸鈉，加水溶解并稀釋至1L，混勻備用。

　　3.4 銅試劑溶液：取銅儲備液50mL，加水50mL，混勻后加入固體無水硫酸鈉12.5g并使其溶解。臨用新配。

　　3.5 洗滌劑：取水50mL，加入10mL銅試劑溶液，10mL氫氧化鈉溶液，混勻，臨用新配。

　　3.6 硫酸溶液（10%）：取100mL濃硫酸加入到800mL左右水中，混勻，冷卻后稀釋至1L。

　　3.7 苯酚溶液（50g/L）：稱取精制苯酚5.0g，加水溶解并稀釋至100mL，混勻。溶液置冰箱中可保存一月。

　　3.8 葡萄糖標準儲備溶液:精密稱在硫酸干燥器中干燥至恒重的葡萄糖標準0.5000g，加溶解，并定容至50mL，混勻，置冰箱中保存。此溶液每毫升含10.0mg葡萄糖。

　　3.9 葡萄糖標準使用液:吸取葡萄糖標準儲備液1.00mL，置于100mL容量瓶中，加水至刻度，混勻，置冰箱中保存。此溶液每毫升含葡萄糖0.10mg。

　　4．儀器

　　4.1 分光光度計

　　4.2 離心機

　　4.3 旋轉混勻器

　　5.分析步驟

　　5.1 標準曲線制備:

　　精密吸取葡萄糖標準使用液0.00，0.10，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00 mL(相當于葡萄糖，0.010，0.020，0.040，0.060，0.080，0.10mg)分別置于25mL比色管中，準確補充水至2.0mL，加入50g/L苯酚溶液1.0mL，在旋轉混勻器上混勻，小心加入濃硫酸10.0mL，于旋轉混勻器上小心混勻，置沸水浴中煮沸2min.，冷卻后用分光光度計在485nm波長處以試劑空白溶液為參比，1cm比色皿測定吸光度值。以葡萄糖濃度為橫坐標，吸光度值為縱坐標，繪制標準曲線。

　　5.2 試樣處理

　　5.2.1 試樣提取:稱取混合均勻的固體試樣2.0g，置于100mL容量瓶中，加水80mL左右，于水浴上加熱2h，冷卻至室溫后補加水至刻度，混勻，過濾，棄去初濾液，收集余下濾液供沉淀多糖。

　　5.2.2 沉淀粗多糖:精密取5.2.1濾液5.0mL或液體試樣5.0mL，置于50mL離心管中，加入無水乙醇20mL，混勻5min.，以3000rpm離心5min.，棄去上清液。殘渣用80%乙醇溶液數(shù)毫升洗滌，離心后棄上清液，反復3—4次操作。殘渣用水溶解并定容至5.0mL，混勻，供沉淀葡聚糖。

　　5.2.3 沉淀葡聚糖:精密取5.2.2溶液2mL置于20mL離心管中，加入100g/L氫氧化鈉溶液2.0mL，銅試劑溶液2.0mL，沸水浴中煮沸2min.，冷卻后以3000rpm離心5min.，棄去上清液。殘渣用洗滌液數(shù)毫升洗滌，離心，棄去上清液，反復3次操作，殘渣用100mL/L硫酸溶液2.0 mL溶解并轉移至50mL容量中，加水稀釋至刻度，混勻。此溶液為試樣測定液。

　　5.3 試樣測定:精密吸取試樣測定液2.0 mL置于25 mL比色管中，加入50g/L苯酚溶液1.0 mL，在旋轉混勻器上混勻后，小心加入濃硫酸10.0mL后于旋轉混勻器上小心混勻，置沸水浴中煮沸2min.，冷卻至室溫，用分光光度計在485nm波長處，以試劑空白為參比，1cm比色皿測定吸光度值。從標準曲線上查出葡萄糖含量，計算試樣中水溶性粗多糖含量。同時作試樣空白實驗。

　　5．4 分析結果表述

　　試樣中水溶性粗多糖的含量按式（5.4.1）計算。

　　5．4．1 計算

　　式中:

　　x—試樣中水溶性粗多糖含量(以葡萄糖計)，mg/g;

　　m1---試樣測定液中葡萄糖的質量，mg;

　　m2---試樣空白液中葡萄糖質量，mg;

　　m---試樣質量，g;

　　V1---試樣提取液總體積，mL;

　　V2---沉淀粗多糖所用試樣提取液體積，mL;

　　V3---粗多糖溶液體積，mL;

　　V4---沉淀葡聚糖所用粗多糖溶液體積，mL;

　　V5--試樣測定液總體積，mL;

　　V6---測定用試樣測定溶液體積，mL。

　　5．4．2 結果表示

　　計算結果保留兩位有效數(shù)字。

　　6.技術參數(shù)

　　回收率：不同食品中不同濃度加標回收的回收率為87.8～110.8%。

　　精密度：同一試樣10次測定結果的RSD為5.8%。

　　干擾因素：測定過程中避免碳水化合物的玷污干擾。

　　靈芝提取物三萜皂甙的檢測方法

　　1，對照品溶液的制備取齊墩果酸對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每lml含0.2mg的溶液，即得。

　　2，標準曲線的制備精密量取對照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml，分別置15ml具塞試管中，揮干，放冷，精密加入新配制的香草醛冰醋酸溶液(精密稱取香草醛0.5g，加冰醋酸使溶解成10ml，即得）0.2ml高氯酸0.8ml，搖勻，在70°C水浴中加熱15分鐘，立即置冰浴中冷卻5分鐘，取出，精密加入乙酸乙酯4ml，搖勻，以相應試劑為空白，照紫外-可見分光光度法(通則0401)，在546nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標、濃度為橫坐標繪制標準曲線。

　　3，供試品溶液的制備取本品粉末約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加乙醇50ml，超聲處理（功率140W，頻率42kHz)45分鐘，濾過，濾液置100ml量瓶中，用適量乙醇，分次洗滌濾器和濾渣，洗液并人同一量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻，即得。

　　4，測定法精密量取供試品溶液0.2ml，置15ml具塞試管中，照標準曲線制備項下的方法，自“揮干”起，同法操作，測定吸光度，從標準曲線上讀出供試品溶液中齊墩果酸的含量，計算，即得。